 | 即使是为同一目的所用的试剂种类繁多，同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。 因此，经常有研究人员向我们问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。 为了解决这样的问题，小光老师将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。 |
◆核酸染色试剂
核酸染色试剂是用于可视化凝胶中的核酸、分析电泳分离后核酸的试剂。溴化乙锭是一种广泛用于核酸染色的染色试剂。但是，溴化乙锭被指出具有致突变性，应谨慎使用。最近，研究人员也开发了安全性高的新型核酸染色试剂。FUJIFILM Wako可提供溴化乙锭，以及及安全性高的SAFELOOK™系列等核酸染色类产品。
◆核酸染色试剂原理
用作核酸染色试剂的化合物，具有通过与核酸结合增强荧光强度的特性。常用的溴化乙锭 (Ethidium Bromide/EtBr) 通过插入DNA双链（也可与单链核酸结合），可将荧光强度提高约20倍。因此能够特异性检测核酸。
图1. EtBr结构图
核酸染色试剂常用的化合物除溴化乙锭之外、还有4',6-二脒基-2-苯基吲哚（4',6-diamidino-2-phenylindole/DAPI）、碘化丙啶（Propidium Iodide/PI）和吖啶橙（Acridine Orange/AO）等。
◆致突变性
由于核酸染色试剂具有与核酸结合的特性，因此可能会诱导突变。实际上，在进行Ames测试时就发现了溴化乙锭具有致突变性1)，处理时需谨慎小心。
FUJIFILM Wako提供的SAFELOOK™系列产品，已在Ames测试中确认致突变性低，可放心使用。
1) Huang, Qing, and Wei-Ling Fu. "Comparative analysis of the DNA staining efficiencies of different fluorescent dyes in preparative agarose
1) gel electrophoresis." Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (CCLM) 43.8 (2005): 841-842.
◆选择染色方法
琼脂糖电泳中的核酸染色有预染色、后染色和上样添加染色三种方法。每种方法的优缺点总结如下。
■ 核酸染色试剂的特点
染色方法 | 预染色 | 后染色 | 上样染色 |
方法 | 预先添加染色试剂至琼脂糖凝胶 | 电泳后将琼脂糖凝胶浸入到加入染色试剂 的缓冲液中 | 向进行电泳的样品添加染色试剂 |
优点 | ● 电泳后无需染色时间 ● 电泳中可观察条带 | ● 即使存在DNA 浓度差，也不会扰乱 ● 电泳图 ● 可长时间电泳 ● 含变性剂的凝胶也可进行染色 ● （需更换缓冲液） | ● 电泳后无需染色时间 ● 电泳中可观察条带 |
缺点 | ● 染色试剂结合导致的DNA浓度差，即 ● 使分子量相同也会使条带在泳道间移动 ● 使用EtBr时，长时间电泳会导致染色 ● 试剂流出凝胶 | ● 电泳后需染色时间 ● 电泳途中不可观察条带 | ● 需均匀加入染色试剂 |
用户推荐 | 想要快速简便获取结果的用户 | 想要知道正确结果的用户 | 想要快速简便获取结果的用户 |
产品推荐 | SAFELOOK™绿色核酸染料/ SAFELOOK™红色核酸染料 溴化乙锭 | SAFELOOK™绿色上样染料 (6×) | |
◆产品列表
低致突变性核酸染料SAFELOOK™
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
SAFELOOK™ Green Nucleic Acid Stain SAFELOOK™ 绿色核酸染料 | 500 μL | |
SAFELOOK™ Red Nucleic Acid Stain SAFELOOK™ 红色核酸染料 | 500 μL | |
SAFELOOK™ Load-Green (6×) SAFELOOK™ 绿色上样染料 (6×) | 1 mL | |
SAFELOOK™ Load-Red (6×) SAFELOOK™ 红色上样染料 (6×) | 1 mL | |
1 mL ×5 |
溴化乙锭
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
Ethidium Bromide Solution 溴化乙啶溶液(EB溶液) | 10 mL |
◆参考文献
大藤道衛 編, 電気泳動なるほどQ&A, 羊土社, 2007
田村隆明 編, ライフサイエンス 試薬活用ハンドブック, 羊土社, 2009
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