生命科学
化学
分析
仪器
耗材
ClearSee™
植物科学新技术 植物透明化试剂

植物科学新技术 植物透明化试剂wako

ClearSee™



ClearSee™ 是一种仅需固定、洗净、透明化三步简单操作即可实现植物组织透明化的试剂。作为植物科学的研究工具,期待可以阐明细胞水平的现象和整个个体之间的系统联系。


HP数据:由名古屋大学大学院理学研究科 栗原大辅特任助教、水多阳子研究员提供


031-25151


◆操作步骤


使用 ClearSee 的透明化方法,只需1)固定、2)洗净、3)透明化三个步骤。详细方法可参考随产品附赠的使用说明书。

以下,是拟南芥叶和幼株的使用案例。


1. 固定


① 使用4%甲醛溶液固定样本*1

1.jpg



② 将样本放入干燥机中,用真空泵减压,在室温下静置30分钟,并固定。

② 以上操作重复两次

② 为了防止植物样品在减压过程中飞出,建议打开管盖,用封口膜密封,并用针在上面扎孔*2,3


2.jpg




2. 洗净


去除固定液,加入1 mL的1×PBS缓冲液,静置1分钟。然后去除1×PBS缓冲液,重新加入1 mL的1×PBS缓冲液,静置1分钟。

以上操作重复两次。



3. 透明化处理


去除1×PBS缓冲液,添加1.3 mL的ClearSee

打开管盖后用封口膜密封,并用针在上面扎孔。放入干燥机中,用真空泵减压,并在室温下静置1小时。

取下封口膜,盖好管盖。避光,室温静置,透明化*4

如有需要可更换新的ClearSee



4. 透明化过程


3.jpg

图4. ClearSee™中的拟南芥叶和幼株



4.jpg

图5. 可以观察到样本周围叶绿素(1-2天后)



3.jpg

图6. 更换新的 ClearSee™ 后的样本



图7. 透明化的拟南芥叶和动株(3-5天后)




使用ClearSee™ 进行透明化需要的物品


1. 高压灭菌锅

2. 局部排气系统(通风室等)

3. 真空泵

4. 干燥机

5. 60°C 恒温器

6. 荧光显微镜

7. 锥形管

8. 微量离心管

9. 封口膜

10. 针

11. 镊子

12. 盖玻片

13. 载玻片

14. 凡士林油


注意


※ 由于植物活体样本含有空气,添加溶液时植物就会漂浮起来。请尽可能地将植物样本浸入固定液中。

※ 请将干燥机设定在-90 kPa左右。根据植物样本的不同,有时减压会过强。减压过强的话,会破坏植物组织和细胞。开始减压后,由于会抽出植

※ 物样本中的空气,会产生气泡。为了让气泡消失,请缓慢调整减压的压强。

※ 从减压状态恢复至大气压强时,请缓慢进行。如果急速恢复至大气压强的话,会破坏植物组织和细胞。

※ 透明化的时间根据植物种类和组织而异,请参照以下的时间。

※ 根:1~2天、叶和幼株:4~7天、雌蕊:2周、成熟组织:4周。



◆观察案例


5. 观察


在载玻片上用凡士林或油脂制作一个围栏,放入适量 ClearSee,用镊子将样本移入,盖好盖玻片,并用荧光显微镜观察。由于 ClearSee干燥后会产生沉淀,所以用凡士林或油脂来防止其干燥。观察结束后,可以将植物样本放回装有 ClearSee 的微管中进行保存。

另外,用 ClearSee 透明化的样本亦可用荧光色素进行染色。细胞核染色时,向 ClearSee 中添加终浓度为 10 μg/ mL 的双苯甲酰亚胺 H33258 三盐酸盐,双苯甲亚胺 H33342 或 DAPI,细胞壁染色时,使用终浓度为 1 mg/mL,静置1小时后,更换新的 ClearSee 再静置1小时后,在荧光显微镜下进行观察。


图片.png


8. 经透明化处理的拟南芥叶在明场中呈透明状态,叶绿素的红色自发荧光消失。

图8.  由于可以对整片叶进行观察,因此也可以观察到维管束内的荧光蛋白。比例尺为 200 μm。



6.jpg


图9使用 ClearSee 透明化的完整的雌蕊的荧光观察。

图2. 用4个颜色(蓝色,绿色,黄色,红色)的荧光蛋白标记花粉管。

图2. 根据参考文献改编转载。



44.jpg


图10使用 ClearSee 处理4天的拟南芥的根。

图10. 生长素应答细胞的细胞核用绿色、全身的细胞核用紫色显示。

图10. 根据参考文献改编转载。



■其他植物的透明化案例


使用 ClearSee 透明化6天后的蓝猪耳、矮牵牛、烟草、番茄、黄瓜、稻叶。

稻叶在透明化时,由于叶子的表面有蜡层,因此很难将溶液渗入组织里,通过在氯仿等有机溶剂中浸泡 10~30 秒除蜡后,开始固定的步骤。


6.jpg


图11使用 ClearSee 透明化的各种植物叶片(6天后)



◆参考文献


Kurihara, D. et al.: Development, 142, 4168-4179 (2015).



点击此处查看产品宣传页



产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
031-25151 ClearSee™ 50 mL 植物透明化用
160-16061 多聚甲醛
Paraformaldehyde
100 g 组织固定用
162-16065 多聚甲醛
Paraformaldehyde
500 g 组织固定用
167-25981 16w/v% 低聚甲醛溶液
16w/v% Paraformaldehyde Solution, Methanol free
1 mL×10A 电子显微镜用
163-25983 16w/v% 低聚甲醛溶液
16w/v% Paraformaldehyde Solution, Methanol free
10 mL×10A 电子显微镜用

免责声明

1. 本公司密切关注本网站发布的内容,但不保证发布内容的准确性、完整性、可靠性和最新性等。

2. 本公司不保证使用本网站期间不会出现故障或计算机病毒污染的风险。

3. 无论何种原因,使用本网站时给用户或第三方造成的任何不利或损害,本公司概不负责。此外,对于用户与其他用户或第三方之间因本网站发生的任何交易、通讯

3. 纠纷,本公司概不负责。

4. 本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗,仅可用于科研等非医疗目的。如任何用户将本网站提供的产品和服务用临床诊断或治

4. 疗,以及他特定的用途或行为,本公司概不保证其安全性和有效性,并且不负任何相关的法律责任。

关注微信公众号及时获取最新资讯
生物微信号
化学分析微信号