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生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)

生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)301577676373.png



残留DNA提取试剂盒遵照中国药典记载的碘化钠法,适用于疫苗和治疗用生物制品所含宿主细胞残余DNA的提取。

残留DNA提取试剂盒可以提取样品中含有的极微量的DNA,回收率较高。DNA的提取操作时间为60-90 min。提取的DNA可以通过qPCR进行定量。



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◆特点


● 高回收率回收微量DNA(100-1,000 fg)

● 无需更换试管(全程仅使用1根试管)

● 整个提取过程仅需60-90 min

● 提供高浓度蛋白样品的前处理实验方案

● 回收后的DNA可通过qPCR、Threshold Assay(Molecular Devices)进行定量

● 采用碘化钠法



◆原理


1. 使样品中的蛋白质和脂质溶于碘化钠和月桂酰肌氨酸钠

2. 异丙醇与糖原选择性地共沉淀DNA。



◆标准步骤





◆应用实例


DNA spiking test(加标回收实验)


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DNA Extractor™ Kit可以高产量提取残留DNA,甚至少量残留DNA。



◆抗体药物适用性研究


从高蛋白溶液中提取DNA


使用不同浓度的IgG溶液检测CHO来源DNA的加标回收率。


方法


1) 向不同浓度的IgG溶液(10-100 mg/mL)中添加2 pg/mL CHO来源DNA。

2) 按照本产品说明书记载的实验方案提取DNA。

      ● 提取实验方案:Protocol#2

      ● 样品前处理:蛋白浓度超过2 mg/mL时实施的前处理方案(Proteinase K处理)

3) 通过qPCR法计算提取的CHO来源DNA的回收率。


结果


不同蛋白浓度溶液的Cq值


Sample

Input

蛋白浓度 (mg/mL)

10

20

40

60

80

100

Cq

31.596

31.566

31.351

31.726

31.502

31.282

31.658

31.599

31.608

31.774

31.787

31.485

31.66

31.338

31.861

31.5

31.85

31.56

31.369

Average Cq

31.511

31.678

31.542

31.788

31.531

31.379

31.659

Difference of Cq

0

-0.167

0.136

-0.246

0.257

0.152

-0.28

Power

1

0.891

1.099

0.843

1.195

1.111

0.824

Recovery Rate (%)

100

89.1

109.9

84.3

119.5

111.1

82.4


不同蛋白浓度溶液的CHO来源DNA回收率

不同蛋白浓度溶液的CHO来源DNA回收率 拷贝.jpg


结果显示,即使蛋白浓度高达100 mg/mL,也能高回收率提取CHO来源DNA。



从抗体药物模拟溶液中提取 DNA


检测抗体药物常用的Buffer及添加剂制备的IgG溶液中的 CHO来源DNA的加标回收率。


方法


1) 向抗体药物中常用的Buffer组成(表1.①-⑥)及添加剂溶液中添加20 mg/mL的IgG蛋白,制备不同的抗体药物模拟溶液。向不同溶液中添加

1) 20 pg/mL CHO来源DNA。

2) 根据本产品说明书记载的实验方案提取DNA。

      ● 提取实验方案:Protocol#2

      ● 样品前处理:蛋白浓度超过2 mg/mL时实施的前处理方案(Proteinase K处理)

3) 通过qPCR法计算提取的CHO来源DNA的回收率。


表1 Buffer组成


No.

Buffer组成

  10 mM PB pH 6.0, 0.15 M NaCl, 2 mM EDTA

  10 mM PB pH 7.4, 0.15 M NaCl, 2 mM EDTA

  50 mM NaOAc pH 5.2, 0.15 M NaCl, 2 mM EDTA

  10 mM PB pH 6.0, 2 mM EDTA

  10 mM PB pH 7.4, 2 mM EDTA

  50 mM NaOAc pH 5.2, 2 mM EDTA


表2 添加剂溶液


Buffer: 10 mM PB pH 6.0, 0.15 M NaCl, 2 mM EDTA


No.

添加剂(浓度)

  Sucrose (10 w/v%)

  Trehalose Dihydrate (10 w/v%)

  D(-)-Mannitol (10 w/v%)

  D(-)-Sorbitol (10 w/v%)

  D(+)-Maltose Monohydrate (10 w/v%)

  L(+)-Arginine Hydrochloride (1 w/v%)

  L‐Histidine (1 w/v%)

  Glycine (1 w/v%)

  Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate   (Tween80) (0.5 v/v%)

  Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monolaurate   (Tween20) (0.5 v/v%)


结果


不同Buffer的Cq值


SampleInputBuffer
123456
Cq31.47331.69331.54431.21831.05831.59531.181
31.36431.19630.97331.56831.08531.34331.112
31.04531.5331.78731.31530.94231.45231.558
Average Cq31.29431.47331.43531.36731.02831.46331.284
Difference of Cq0-0.179-0.141-0.0730.266-0.1690.01
Power10.8830.9070.9511.2030.891.007
Recovery Rate (%)10088.390.795.1120.389100.7


不同Buffer的CHO来源DNA回收率

不同Buffer的CHO来源DNA回收率.png


不同添加剂溶液的Cq值


Sample

Input

添加剂溶液

Cq

31.473

31.826

31.327

30.907

31.143

31.071

31.525

31.525

31.013

31.086

31.364

31.194

30.991

31.759

31.103

31.279

31.068

31.442

31.203

31.34

30.87

31.045

30.703

31.009

30.978

31.225

31.479

30.757

31.02

31.02

Average Cq

31.294

31.241

31.159

31.225

31.123

31.109

31.273

31.461

31.162

31.124

30.992

Difference of Cq

0

0.053

0.135

0.069

0.171

0.185

0.021

-0.167

0.132

0.17

0.302

Power

1

1.037

1.098

1.049

1.126

1.137

1.015

0.891

1.096

1.125

1.233

Recovery Rate (%)

100

103.7

109.8

104.9

112.6

113.7

101.5

89.1

109.6

112.5

123.3


不同添加物溶液的CHO来源DNA回收率

2917091791329786.jpg


结果显示,即使含有不同Buffer组成和添加剂的IgG溶液也能高回收率提取CHO来源DNA。



◆试剂盒构成


产品编号

内容物

内容量

299-81111

碘化钠溶液, CP

26 mL

296-81121

月桂酰肌氨酸钠, CP

1.2 mL

293-81131

洗净液A, CP

42 mL

290-81141

洗净液B, CP

40 mL×2

297-81151

糖原溶液, CP

0.1 mL


备注:每种成分不单独出售


※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。


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产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
292-81101 残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)
DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method (Sodium Iodide Method)
50 tests - -

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