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Anti-SOD1(ALS-related mutants)Cocktail,Human,Rat-Mono (MS785/MS27)
全面检测ALS相关SOD1突变体的混合型抗体

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全面检测ALS相关SOD1突变体的混合型抗体

Anti-SOD1(ALS-related mutants)Cocktail,Human,Rat-Mono(MS785/MS27)



本产品为两种针对SOD1突变体的抗体混合物。SOD1突变体被认为是导致神经性疾病肌萎缩性侧索硬化(ALS)的原因之一,本产品可特异性识别SOD1突变体的共通二级结构,并且通过免疫沉淀后以Western blot或免疫染色等方法可以检测出上百种SOD1突变体。

另外,本混合型抗体也适用于缺锌性内质网应激相关的SOD1研究。详细请浏览“MEMO——锌缺乏和SOD1立体结构变化”。

 

本产品仅供研究。研究以外不可使用。

本产品基于东京大学 药学系研究科 细胞情报学教室的研究成果产品化而成。



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免疫沉淀后突变体SOD1的检测实例


在HEK293细胞中表达野生型以及不同突变型SOD1,裂解细胞后添加各抗体(MS785:5 μg/mL, MS27:2 μg/mL, MS785/MS27混合:1 μg/mL)并反应10小时,然后使用Protein G 磁珠进行免疫沉淀。结果显示,MS785和MS27在经过免疫沉淀反应后,未识别出野生型(WT)但与突变体特异性结合。在抗原位点出现突变时,MS785和MS27无法单独识别,但是补充MS785/MS27混合体后,即可检测出来。



◆肌萎缩性侧索硬化(ALS)与SOD1


肌萎缩性侧索硬化(ALS;Amyotrophic Lateral Sclerosis)是一种由于运动神经的细胞死亡导致全身骨骼肌无力、主要症状为肌肉萎缩的神经退行性疾病。90%的ALS为非遗传性发病,10%左右为遗传性发病,并且已经鉴定出了约20种致病基因。其中因氧化还原酶SOD1(Cu/Zn Superoxide Dismutase)的突变导致发病的案例最多,而表达SOD1突变体的转基因小鼠也作为ALS的动物模型使用。借助各种研究手段我们有望阐明由SOD1突变导致的ALS发病机理。

SOD1是一种在活性中心带有铜离子与锌离子的金属酶,主要负责分解细胞内产生的活性氧。虽然SOD1是一种相对较小的蛋白,只有154个氨基酸(人)、分子量仅为24 kDa,但是却有着上百种突变体(图1)。这些突变体基本不会影响分解天然活性氧的酶活性。因此,研究认为,ALS的发病中存在着酶活性以外的其他因素,而伴随突变的毒性获得(toxic gain of function)被视为极有可能的因素。

原本,野生型SOD1形成二聚体,但有关SOD1突变体,东京大学一条秀宪教授等人已澄清了的以下要点:

● 上百种各形各式的SOD1突变体采用了与野生型SOD1不同的共通二级结构(图2)。

● 通过与内质网中的蛋白降解途径(ERAD)的构成蛋白Derlin-1相结合获得细胞毒性。

并且,以SOD1突变体与Derilin-1结合位点为基础,成功开发出能够特异性识别突变体立体结构的大鼠单克隆抗体,克隆MS785和MS27。这些抗体作为阐明SOD1突变引发的ALS发病机制的优秀工具备受期待。


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图1  报告中SOD1突变位点的案例



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图2 SOD1野生型与突变体的结构区别以及抗体识别位点



◆特点


● 混合了抗SOD1大鼠单克隆抗体克隆MS785和克隆MS27的混合型抗体。

※ 亦可分别购入克隆MS785、MS27。

● 克隆MS785和MS27识别SOD1突变体共通的单体二级结构,且拥有在免疫沉淀后检测出上百种SOD1突变体的实绩。

● 可以通过免疫细胞染色法特异性检测SOD1突变体。

● 在缺锌条件下可以检测作为内质网应激的原因之一的野生型SOD1二级结构变化。适用于内质网应激研究和SOD1基础研究。详细请浏览“MEMO——锌缺乏和SOD1二级结构改变”。



◆抗体信息


克隆名

MS785

MS27

抗体种类

大鼠单克隆抗体

同种型

IgG2b/κ

IgG2a/κ

交叉性

性状

Protein G纯化(0.5 mg/mL),storage buffer:50%甘油/PBS



■ 关于克隆MS785与MS27的区别


● MS785是以人SOD1的6~16氨基酸序列,MS27是以人SOD1的30~40氨基酸序列分别作为抗原制备的单抗。

● 均可广泛地检测突变体,但无法检测到某些每个表位均有突变的特定突变体。

● 由于MS785和MS27有互补性,所以混合型抗体可以补全抗原位点突变体的检测。



◆应用


● 免疫沉淀,免疫染色:突变体检测

● ELISA:突变体检测(详细请参考原著文献2。)

● Western blot:同时检测突变体与野生型

注意:在变性状态下,不仅会检测到SOD1突变体,也会检测到野生型SOD1。因此,实验过程中必须防止蛋白变性,请勿使用SDS等变性剂。



◆原著文献


1. Fujisawa, et al., Ann. Neurol., 72, 739~749 (2012).

1. "A novel monoclonal antibody reveals a conformational alteration shared by amyotrophic lateral

1. sclerosis-linked SOD1 mutants."


2. Fujisawa, et al., Neurobiol. Dis., 82, 478~486 (2015).

2. "A systematic immunoprecipitation approach reinforces the concept of common conformational

1. alterations in amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."



◆通过免疫染色对SOD1突变体的检测实例


在HEK293细胞表达野生型以及G93A突变体SOD1(FLAG融合蛋白),分别使用MS785、MS27以及MS785/MS27混合型抗体(红)和抗FLAG抗体(绿)进行免疫染色(工作浓度:1 μg/mL)。可以确认,野生型以及G93A突变体均倍倍抗FLAG抗体检测到信号,但是MS785、MS27以及MS785/27混合型抗体均不与野生型反应,仅与突变体反应。


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◆缺锌状态下野生型SOD1的检测实例


本抗体可检测出缺锌时野生型SOD1的动态结构变化。不仅ALS研究,也适用于SOD1的基础研究。

● 本产品有在血清缺乏条件以及锌螯合剂TPEN处理下检测出内源性野生型SOD1的检测实例。

● MS785、MS27以及混合物都可用于检测。



锌缺乏和SOD1立体构造改变


OD1是拥有锌离子的金属蛋白。东京大学的一条教授等人明确,在缺锌状态下野生型SOD1会释放锌离子,改变二级结构,并采取SOD1突变体相似的单体结构。这种结构变化,令原本不结合的内质网相关性降解(ERAD)蛋白Derlin-1获得结合能力,诱导了ER 应激(内质网应激)。即使是野生型SOD1,本产品也能识别出缺锌状态下的立体结构变化,检测出缺乏锌的SOD1。因此适用于SOD1基础研究以及ER应激研究。


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参考文献:


1.  Fujisawa, et al., Ann. Neurol., 72, 739~749 (2012).

1.  "A novel monoclonal antibody reveals a conformational alteration shared by amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

2. Homma, et al., Molecular Cell, 52, 75~86 (2013).

1.  "SOD1 as a Molecular Switch for Initiating the Homeostatic ER Stress Response under Zinc Deficiency."

3. Fujisawa, et al., Neurobiol. Dis., 82, 478~486 (2015).

1.  "A systematic immunoprecipitation approach reinforces the concept of common conformational alterations in amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."


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将HEK293细胞用10 μM锌螯合剂TPEN处理8小时。细胞裂解后,分别使用MS785、MS27以及MS785/MS27混合抗体进行免疫沉淀。由于锌离子的缺失,内源性野生型SOD1与SOD1突变体同样被MS785、MS27检测出来。



◆储存温度


20°C


※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。



产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
FDV-0021A Anti-SOD1(ALS-related mutants)Cocktail, Human, Rat-Mono(MS785/MS27)
Anti-SOD1(ALS相关突变体)混合型,人,大鼠单克隆(MS785/MS27)
100 μg
FDV-0021B Anti-SOD1(ALS-related mutants), Human, Rat-Mono(MS785) 
Anti-SOD1(ALS相关突变体),人,大鼠单克隆(MS785)
100 μg
FDV-0021C Anti-SOD1(ALS-related mutants), Human, Rat-Mono(MS27) 
Anti-SOD1(ALS相关突变体),人,大鼠单克隆(MS27)
100 μg

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