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ISOGEN II RNA 抽提试剂
ISOGEN II

ISOGEN II RNA抽提试剂0715519396055346.png

ISOGEN II

从动物组织和培养细胞中高效分离纯化含有小 RNA 的总 RNA



◆原理


      ISOGEN II 是从动物组织和培养细胞中总 RNA 和小 RNA 的抽提试剂。本品是含有苯酚和胍的均相液体,根据与细胞成分的相互作用,能单一地分离 RNA 。
      使用旧产品(ISOGEN 和 ISOGEN-LS)需要添加氯仿,要进行液相分离,而本产品则无需此步骤。在样品中加入 ISOGEN II 溶解或是均质化之后,再添加水,因为 DNA、蛋白质、多糖类等会形成不溶性沉淀,进行离心分离后可以去除。用乙醇沉淀并洗涤、溶解得到上清之后,能分离出高纯度的 RNA 。

 

 

◆优点特色


● 不需使用氯仿分离 RNA
● 比起旧产品( ISOGEN 等),小RNA 的抽提效率更高
● 可以把大 RNA(>200 bases)和小 RNA(<200 bases)分离(同时提供不分离的方案)
● DNA 污染少,抽提的 RNA 可以直接用于 RT-PCR 和 RT-qPCR 上
● 约 1 h 可完成 RNA 的抽提



内容和保存条件


<span style="font-family: 微软雅黑, Microsoft YaHei;"><span style="font-family: 微软雅黑, 'Microsoft YaHei'; font-size: 14px;">无标题文档</span></span>

产品名称

构成

ISOGEN II

ISOGEN II

100 mL

使用手册

1本


冷藏保存
请在购买日起6个月内使用
本品可在室温下运输。产品到达后,在2~10℃条件下保存即可正常使用

产品安全数据图表(MSDS)
ISOGEN II MSDS

使用手册
ISOGEN II 手册



◆案例应用


操作流程


0815547047925228.jpg



◆使用例子


Data 1 抽提得到的 RNA 电泳

根据 ISOGEN 和 ISOGEN II 的方案抽提 RNA,进行电泳


blob.png

  M:RNA Ladder (Code No.311-06261)
  Lane1:ISOGEN 抽提总 RNA(2 μg)
  Lane2:ISOGEN II 抽提总 RNA(2 μg)
  Lane3:ISOGEN II 抽提高分子 RNA(2 μg)
  Lane4:ISOGEN II 抽提 小RNA(0.2 μg)
  1.2% Agarose S(甲醛变性)EtBr 染色


2414509464752522.jpg

  Lane1:ISOGEN 抽提总 RNA(5 μg)
  Lane2:ISOGEN II 抽提总 RNA(5 μg)
  Lane3:ISOGEN II 抽提高分子 RNA(5 μg)
  Lane4:ISOGEN II 抽提小 RNA(0.5 μg)
  12% 聚丙烯酰胺(Urea 变性)EtBr 染色


ISOGEN II 能抽提和 ISOGEN 同等的总 RNA

ISOGEN II 能对 200 base 以上的高分子 RNA 和 10~200 base 的小 RNA 进行分离



Data 2 ISOGEN 和 ISOGEN II 抽提的总 RNA 用“3D-GeneHuman miRNA Oligo chip(东来株式会社)分析。


2.jpg


ISOGEN II 比 ISOGEN 能更完整地抽提 miRNA

 


Data 3 RT-PCR


用 ISOGEN 和 ISOGEN II 从 HeLa 细胞中提取出 RNA 并定性,再用 PT-PCR 检测出 β-Actin 基因。同时进行没有经过 RT 反应的对照实验。


blob.png

tu.jpg


1:模板RNA量 500 ng
2:模板RNA量 100 ng
3:模板RNA量 20 mg
M:Gene Ladder 100

实验证明以ISOGEN II抽提的RNA与以ISOGEN抽提的RNA相比,DNA残留更少。



Data 4 RNA 提取量的参考值

分别用 “大 RNA 的提取”和“总 RNA 的提取”方案得到的 RNA 的提取量的参考值如下:


试剂

大 RNA 的提取

总 RNA 的提取

组织

肝脏

5~7 g RNA/mg tissue

6~8 μg RNA/mg tissue

肾脏、脾脏

3~4 g RNA/mg tissue

3~4 μg RNA/mg tissue

骨骼肌、脑、肺

0.5~1.5 g RNA/mg tissue

0.5~1.5 μg RNA/mg tissue

胎盘

1~3 g RNA/mg tissue

1~3 μg RNA/mg tissue

培养细胞

上皮细胞

5~8 g RNA/108 cells

5~10 μg RNA/106 cells

成纤维细胞

3~5 g RNA/108 cells

4~6 μg RNA/106 cells



注意事项


● 本品是实验研究用的试剂,不能作为医药品或其他目的使用。另外,如果您对试剂的基本的知识不了解。请不要使用。

● 因为 ISOGEN II 是医药用外有害物质(苯酚制剂),所以请小心操作。
● 使用时请穿着适当的防护设备(手套、眼镜等)。
● 请不要吸入蒸汽,进行充分的通风。
● 如果接触皮肤或眼睛,请用大量的水冲洗至少15分钟,并前往医院就诊。
● 本品的操作请按照手册记载的内容进行
● 对于和手册记载内容不同的操作带来的事故,日本基因不负任何责任。



参考文献

 


1. 

Chomczynski, P. Reagents and methods for isolation of purified RNA, US and International Patents Pending.


2. 

Chomczynski, P. and Sacchi, N:Single step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol- chloroformextraction”, Anal. Biochem., 162, 156-159(1987)


3. 

Chomczynski, P.:A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples”, Biotechniques, 15, 532-537(1993)


4. 

Wilfinger, W., Mackey, K. and Chomczynski, P.:Effect of pH and ionic strength on thespectrophotometric assessment of nucleic acid purity”, Biotechniques, 22, 474-481(1997)




产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
311-07361 ISOGEN Ⅱ
总RNA及小RNA提取试剂 
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