ISOGEN II
总RNA及小RNA提取试剂
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离心后的沉淀 | ISOGEN II 100 mL |
ISOGEN II 是从动物组织和培养细胞中提取总RNA和小RNA的试剂。本品是含有苯酚和胍的均匀液体，根据与细胞成分的相互作用，能一步分离RNA。
使用旧产品（ISOGEN和ISOGEN-LS）需要添加氯仿，要进行液相分离，而本产品则无需此步骤。在样品中加入ISOGEN II溶解或是均质之后，添加水， DNA、蛋白质、多糖类等沉淀（不溶化），进行离心分离后可以去除（右图）。用酒精沉淀、洗净、溶解上清液之后，能分离出高纯度的RNA。若配合ISOGENOME 使用，也能够跟ISOGEN一样从同一样本中提取DNA。
◆特点
• 无需使用氯仿分离RNA
• 相比旧产品（ISOGEN等），小RNA的提取率更高
• 可以把高分子RNA（＞200 bases）和小RNA（＜200 bases）分离（也有不分离的方案）
• 混入的DNA较少，提取的RNA可以直接使用RT-PCR和定量RT-PCR
• 约一小时内可提取出RNA
◆用途
◆产品列表
ISOGEN II （10 mL、100 mL） | |||
产品 | 包装 | 保存条件 | 备注 |
ISOGEN II | 1瓶 | 2～10°C (阴暗处) | 非医疗用剧毒物 外观：青色溶液 容器（塑料瓶）外配有袋子。 |
运输方法
本品在室温下运输。产品到达后，在2~10℃条件下保存即可正常使用。
◆使用案例
操作流程
・除了本产品，根据需准备RNase free water、乙醇、4-溴甲氧基苯异丙醇。
・可使用聚丙烯管，使用前确认是否能够承受离心强度（12K × g）及ISOGEN II（苯酚）。
・离心操作建议在4-28℃进行。
实验数据
2. 检验出miRNA
3. RT-PCR
4. RNA提取共沉淀剂效果（测定吸光度）
5. RNA取量的基准
6. 使用ISOGEN II从植物提取总RNA
7. 使用ISOGEN II从植物提取高分子RNA及小RNA分离＜改变流程＞
Data 1：提取的RNA的电泳
按照ISOGEN及ISOGEN Ⅱ的操作顺序，提取RNA，进行电泳。
琼脂糖凝胶电泳 | |
| M: RNA Ladder (编号:311-06261)
道1：ISOGEN 提取 总RNA (2 μg) 道2：ISOGENⅡ 提取 总RNA (2 μg) 道3：ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (2 μg) 道4：ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.2 μg)
1.2% Agarose S （甲醛变性） EtBr 染色 |
聚丙烯酰胺凝胶电泳 | |
| 道1：ISOGEN 提取 总RNA (5 μg) 道2：ISOGENⅡ 提取 总RNA (5 μg) 道3：ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (5 μg) 道4：ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.5 μg)
12% 聚丙烯酰胺凝胶 （Urea 变性） EtBr 染色 |
▶ 道1、2中，ISOGENⅡ与ISOGEN一样，可提取全DNA。
▶ 道3、4中，ISOGENⅡ可区分200bases以上的高分子RNA及10~200bases的小RNA。
Data 2：检验miRNA
对使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ提取的总RNA进行3D-Gene Human miRNA Oligo chip分析 ▶ ISOGEN Ⅱ比ISOGEN更能显示miRNA。 |
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Data 3：RT-PCR
使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ从Hela细胞提RNA作为模板。通过RT-PCR检测出β-actin基因。同时，进行不产生RT反应的控制组实验。
PCR条件
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| 1：模板RNA量 500 ng 2：模板RNA量 100 ng 3：模板RNA量 20 ng M：Gene Ladder （编号：316-06951） |
▶ 使用ISOGEN Ⅱ提取的RNA比使用ISOGEN抽提的RNA混入DNA较少。
Data 4：RNA提取共沉淀剂效果（测定吸光度）
ISOGEN Ⅱ的使用指南中分离小RNA时，对使用共沉淀剂Ethachinmate（Nippon Gene 产品编号：312-01791）或者Glycogen（和光纯药工业 产品编号：077-05311）时提取到小RNA情况进行了比较。
方法 按照使用指南，从Hela细胞及小鼠肝脏回收小RNA，检测吸光度，计算小RNA的含量。将使用Ethachinmate提取到的数量看作1，在图表中列出了含量的相对值。 |
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▶ 使用Glycogen作为共沉淀剂回收小RNA时的回收量较多，变异较少。
Data 5：RNA取量的基准
实验材料 | 高分子 RNA 的离析 | 总 RNA的离析 | |
组织 | 肝脏 | 5～7 µg RNA/mg tissue | 6～8 µg RNA/mg tissue |
肾脏、脾脏 | 3～4 µg RNA/mg tissue | 3～4 µg RNA/mg tissue | |
骨骼肌脑、肺 | 0.5～1.5 µg RNA/mg tissue | 0.5～1.5 µg RNA/mg tissue | |
胎盘 | 1～3 µg RNA/mg tissue | 1～3 µg RNA/mg tissue | |
培养细胞 | 上皮细胞 | 5～8 µg RNA/106 cells | 5～10 µg RNA/106 cells |
成纤维细胞 | 3～5 µg RNA/106 cells | 4～6 µg RNA/106 cells | |
Data 6：使用ISOGEN II从植物提取总RNA
Data 7：使用ISOGEN II从植物抽提高分子RNA及小RNA分离＜变化流程＞
从植物抽提高分子RNA及小RNA离析例子 (PDF 218KB)
◆注意事项
• 本品是实验研究用的试剂，不能作为医药品或其他目的使用。另外，如果您对试剂的基本的知识不了解，请不要使用。
• ISOGEN II是非医疗用剧毒物（苯酚制剂），请小心操作。
• 使用时请穿着适当的防护设备（手套、眼镜等）。
• 操作场所保持通风，以免吸入蒸汽。
• 如果接触皮肤或眼睛，请用大量的水冲洗15分钟或以上，并及时就诊。
• 请按照说明书进行操作。
• 对于因不按照说明书操作而导致的事故，Nippon Gene不负任何责任。
◆备注
本产品是实验研究用试剂，请勿用作医疗用途。
◆资料 Data Sheet
产品说明书
• ISOGEN II 产品说明书第三版（100 mL产品小冊子） (PDF 195KB)
SDS(Safety Data Sheet)
宣传单
◆相关产品
• RNA抽提用试剂 ISOGEN with Spin Column
Q：可以从全血等血液样本中抽提RNA吗？
A：ISOGEN II 难以提取出高纯度的RNA，建议使用ISOGEN-LS。
Q：可以提取DNA或蛋白质吗？
A：旧法使用 ISOGEN，可以从同一样本回收DNA及蛋白质，但由于此次研发的是提取RNA的方法，ISOGEN II 中混入的DNA较少，无法提取DNA
及蛋白质。不过，配合使用DNA提取试剂 ISOGENOME，可回收DNA样本。
参考文献
[ 1 ] | Chomczynski, P. ： Reagents and methods for isolation of purified RNA, US and International Patents Pending. |
[ 2 ] | Chomczynski, P. and Sacchi, N.：”Single step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol- chloroform extraction”, Anal. Biochem，162, 156-159（1987） |
[ 3 ] | Chomczynski, P.：”A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples”, Biotechniques,15, 532-537（1993） |
[ 4 ] | Wilfinger, W., Mackey, K. and Chomczynski, P.：”Effect of pH and ionic strength on the spectrophotometric assessment of nucleic acid purity”,Biotechniques, 22, 474-481（1997） |
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