从石蜡包埋组织切片提取RNA试剂盒
ISOGEN PB Kit
本产品是石蜡包埋组织切片RNA提取试剂盒。包含从脱石蜡，Proteinase K 处理组织到利用 ISOGEN-LS 提取RNA，非常简便、短时间（约２小时）即可完成。提取的RNA可用于RT-PCR检测。
◆特点
● 从石蜡包埋组织切片提取RNA
● 操作简便，且用时少（２小时）
● 提取的 RNA 可用于 RT-PCR
◆用途
● RT-PCR 检测 RNA 病毒
● RT-PCR 检测 mRNA
● 检测石蜡包埋组织切片的 RNA 保存度等
◆产品内容
产品 | 包装 | 备注 |
Proteinase K（20 mg/mL） | 100 µL×1 | |
Extraction Buffer | 3 mL×1 | 可室温保存 |
ISOGEN-LS | 10 mL×1 | 非医疗用剧毒物 可冷藏保存（2～10°C） |
Ethachinmate | 60 µL×1 | 可冷藏保存（2～10°C） |
Deoxyribonuclease（RT Grade） | 20 µL×1 | |
10× DNase（RT Grade）Buffer II | 100 µL×1 | |
Stop Solution（RT Grade） | 100 µL×1 | |
DEPC treated Water | 500 µL×2 | 可室温保存 |
保存方法
冷冻保存（-20°C）
试剂盒以外必需的试剂
● Lemosol® 或Lemosol® A
● 乙醇
● 氯仿
● 异丙醇
◆使用实例
操作前需知
从石蜡包埋组织提取RNA 时， RNA 的分解持续到包埋过程，其 RNA 的完整性比从新鲜组织提取的 RNA 低。
从哺乳动物的新鲜组织提取的 total RNA 经过电泳后，检测出明亮的 28S rRNA 和 18S rRNA 条带，其比例约为 2 : 1。使用石蜡包埋组织进行提取时，无法得出这个结果。实际上，使用小鼠的石蜡包埋组织进行提取实验，几乎无法检测 28S rRNA 。因此，在包埋过程中引导RNA分解。石蜡包埋状态关系到 RNA 的分解程度。有可检测出 18S rRNA 的石蜡块，也有 18S rRNA 降解太多而无法检测出来。Nippon Gene 将判断基准设定为剩余一个 18S rRNA，in situ hybridization 等、需要高保存度RNA时，建议设定标准。
即使 RNA 已分解（包括无法确认 18S rRNA 的情况），可使用 RT-PCR 检测出基因，使用 RT-PCR 时，RNA 的完整性较好。但是使用石蜡包埋组织切片进行 PCR 时，扩增效率比一般情况的低，请注意避免引物长度设置过大（400 bp 以下，尽量设置为 200 bp以下）。
操作流程
操作实例1 从小鼠颌下腺石蜡包埋组织切片提取RNA
按照操作流程，从4片10 µm小鼠颌下腺石蜡包埋组织切片，提取RNA ，取1/4的 量（5 µL），使用1% 福尔马林変性Agarose S 进行电泳。
操作实例2 RT-PCR检测小鼠Gapd基因
从小鼠颌下腺石蜡包埋组织切片提取500 ng RNA， DNase 处理后，进行RT-PCR，检测出小鼠glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase（Gapd）基因外显子5（258 bp）。
关于微量样本RT-PCR
对于无法得到提取RNA的电泳结果或10 ng 以下的情况，建议添加RT反应補助试剂RTmate，进行逆转录。
◆备注
● 本产品为实验研究用试剂。请勿用于医疗用途。
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 315-06421 | ISOGEN PB Kit ISOGEN石蜡组织切片RNA提取试剂盒 |
20次用量 | - | - |
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