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CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 2.0
CYTO-ID® Autophagy detection kit 2.0

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  CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0 使用新型染料检测自噬小泡和监控活细胞自噬流,选择性标记积累的自噬小泡。染料已通过优化,不染溶酶体,在自噬前体、自噬体和自噬溶酶体里呈现出明 亮的荧光。该试剂盒提供了一种无需细胞转染,可以在活细胞中监控细胞自噬的快速定量方法。



◆特点


  ● 更明亮,更耐光,特异性染色自噬小泡

  ● 无需转染及转染效率验证

  ● 快速量化原生异质性细胞群中的自噬

  ● 不染溶酶体,减少其他染料的背景干扰

  ● 便于高通量筛选自噬激活剂和抑制剂



◆原理


  该产品所用探针是阳离子两亲性示踪剂(CAT)染料,以类似诱导磷脂药物的方式迅速进入到细胞中。染料的功能基团能够选择性标记与自噬通路相关的小泡,而不会在溶酶体中聚集。


胞内物质被扩大的膜囊包裹,吞噬泡形成双层膜囊泡,成为自噬体。自噬体外膜随后与溶酶体融合,和内部物质被自噬性溶酶体降解。自噬的各种调节因子也被描绘于图中。

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自噬原理图



◆应用


CYTO-ID® 绿色检测试剂2(A组)在PBS确定的吸光度和荧光图谱(499/548 nm)。


Hoechst33342(图B)在1X测定缓冲液来确定的吸光度和荧光图谱(350 /461 nm)。

的发放


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HeLa cells使用 CYTO-ID® Green Detection Reagent 2进行染色


(A) 完全培养基 (B) 在饥饿培养基 (EBSS)中添加40 µM Chloroquine培养4 h 。在含有Chloroquine 的EBSS培养基中培养的细胞表现非常明亮的绿色荧光信号和点状结构。







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运用流式细胞术分析Jurkat细胞的自噬


通过0.5 µM Rapamycin (RAP), 10 µM Chloroquine (CLQ)处理或不处理Jurkat细胞,或两者一起处理20 h。CYTO-ID® Green Detection Reagent 2染色30 min后,洗脱,用流式细胞仪分析。直方图叠加呈现结果。用RAP+CLQ处理细胞显示荧光有升高。





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微孔板分析HepG2细胞的自噬


HepG2经过DMSO(对照),0.5 μM Rapamycin (Rap), 10 µM Chloroquine (CLQ),或0.5 µM Rap 和10 µM CLQ同时培养20 h。细胞经过Hoechst 33342染色进行细胞数目标准化。Rap 和CLQ同时处理细胞显示自噬作用上升。



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相关产品资料请点击下载:活细胞荧光分析 Ver.3


自噬技术文章


通过流式细胞术定量自噬解释与白血病肿瘤生长的联系

Posted By Morgan Mathieu

Tags: Autophagy, Cancer



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产品编号

产品名称

规格

备注

应用

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细胞可渗透的DNA染色应用广泛。

≥93%(HPLC),FC,荧光检测

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FC,荧光显微镜,荧光检测

ENZ-51035-K100

100 tests



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主要参考文献



(1)


A live-cell fluorescence microplate assay suitable for monitoring vacuolation arising from drug or toxic agent treatment: J. Coleman, et al.; J. Biomol. Screen. 15, 398 (2010), 摘要;


(2)


Methods in mammalian autophagy research: N. Mizushima, et al.; Cell 140, 313 (2010),摘要;


(3)


Assays to Assess Autophagy Induction and Fusion of Autophagic Vacuoles with a Degradative Compartment, Using Monodansylcadaverine (MDC) and DQ-BSA: C.L. Vazquez & M.I. Colombo; Methods Enzymol. 452, 85 (2009),摘要;


(4)


Desmethylclomipramine induces the accumulation of autophagy markers by blocking autophagic flux: M. Rossi, et al.; J. Cell Sci. 122, 3330 (2009),  摘要;


(5)


Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy in higher eukaryotes: D.J. Klionsky, et al.; Autophagy 4, 151 (2008),  摘要;





产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
ENZ-KIT175-0200 Cyto-ID® Autophagy detection kit 2.0
 CYTO-ID®自噬检测试剂盒2.0
200 tests -

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